高GC缓冲液信赖推荐「友名生物」

楼主:友名生物  时间:2021-05-10 12:20:04
冲榜 守护 脱水 打赏 看楼主 设置
高GC缓冲液信赖推荐「友名生物」[友名生物3da892b]

 PCR技术的基本原理

PCR技术是在模板DNA、引物和四种dNTP等存在的条件下.依赖于DNA聚合酶(T aq酶)的酶.促合成反应。其具体反应分三步:变性、退火、聚合。以上三步为一个循环,每一 循环的产物DNA又可以作为下一个循环模板,数小时后,介于两个引物之间的目的DNA得到了大量的copy,经25~ 30次循环DNA数量可达2x1067拷贝数。

锚定PCR(Anchored PCR. APCR技术.

用酶法在一通用引物反转录cDNA3"-末端加上一段已知序列,然后以此序列为引物结合位点对该cDNA进行扩增,称为APCR.应用:它可用于扩增未知或全知序列,如未知cDNA的制备及低丰度cDNA文库的构建。

等位基因特异性PCR(Allele- specificPCR. ASPCR技术

ASPCR依赖于引物3”-端的一个碱基错配,不仅减少多聚酶的延伸效率,而且降低引物-模板复合物的热稳定性。这样有点突变的模板进行PCR扩增后检测不到扩增产物.可用于检测基因点突变。

单链构型多态性PCR(single- strandconformational polymorphism PCR, SSCPPCR)技术

SSCP- PCR是根据形成不同构象的等长DNA单链在中性聚丙1烯酰胺凝胶中的电泳迁移率变化来检测基因变异。在不含变性剂的中性聚丙1烯酰胺凝胶中,单链DNA迁移率除与DNA长度有关外,更主要取决于DNA单链所形成的空间构象。相同长度的单链DNA因其顺序不同或单个碱基差异所形成的构象就会不同,PCR产物经变性后进行单链DNA凝胶电泳时,每条单链处于一定的位置.靶DNA中若发生碱基缺失、插入或单个碱基置换时.就会出现泳动变位。从而提示该片段有基因变异存在。

基因分型

PCR可用于检测特定细胞或生物体中等位基因的序列差异。例如,基因敲除和敲入小鼠等转基因生物的基因分型[3]。引物对经设计位于目标区域侧翼,可根据是否存在扩增子及扩增子长度来检测遗传变异。

但是如果为了检测特定核苷酸突变,则必须对扩增的序列进行进一步分析。例如, PCR扩增子测序就是研究单核苷酸变异(SNVs)和单核苷酸多态性(SNP)的方法之一。强烈推荐使用高保真DNA聚合酶,以防止在PCR过程中引入多余的突变。

通过PCR进行基因分型也是对癌1症和遗传病中的 突变进行遗传分析的一个基本方式。

0打赏

3 点赞

主帖获得的天涯分: 75.96
楼主发言:605次 发图:0张 |
朋友图片表情草稿箱

您还可以保存份草稿

帮助
    草稿箱介绍:
    ·每个草稿箱可保存50份草稿
    ·草稿需要手动保存
    ·审核不通过的帖子也会打回到草稿箱中
    ·草稿只保存标题和正文(专辑、投票等内容不做保存)
    ·草稿箱如果存满请手动删除

    希望小小的功能能给您带来一些些帮助

    ——致力关心网友的涯叔

    请遵守天涯社区公约言论规则,不得违反国家法律法规

    点赞列表

    x
    共有人点赞

      本楼点赞抽钻记录

      x

      埋了

      人抽中

        收藏本帖 搬砖回复 回到顶部
        最新红包
          码字不容易,亲,赏点给些动力吧!