全血DNA纯化来电咨询「友名生物」

楼主:友名生物  时间:2021-09-24 15:15:07
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全血DNA纯化来电咨询「友名生物」[友名生物3da892b]

人ELISA试剂盒的原理及优势:

1、ELISA是以immune学反应为基础,将抗原、antibody的特异性反应与酶对底物的有效催化作用相结合起来的一种敏感性很高的试验技术。

2、由于抗原、antibody的反应在一种固相载体──聚苯乙1烯微量滴定板的孔中进行,每加入一种试剂孵育后,可通过洗涤除去多余的游离反应物,从而保证试验结果的特异性与稳定性。

3、Elisa生物试验是一种敏感性高,特异性强,重复性好的实验诊断方法。由于其试剂稳定、易保存,操作简便,结果判断较客观等因素,已广泛应用在immune学检验的各领域中。

4、ELISA检测试剂盒适用于体外定性检测人血1清或血浆中的抗人类HEV病毒Mantibody ELISA检测。

5、ELISA的基础是抗原或antibody的固相化及抗原或antibody的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或antibody仍保持其immune学活性,酶标记的抗原或antibody既保留其immune学活性,又保留酶的活性。

酵母基因组DNA提取好方法

DNA提取主要是CTAB方法,其他的方法还有物理方式如玻璃珠法、超声波法、研磨法、冻融法。化学方式如异硫CN酸胍法、碱裂解法。生物方式:酶法。根据核酸分离纯化方式的不同有;硅质材料、阴离子交换树脂等。

提取基因组DNA和细胞核DNA是不同的方法

提取细胞核要先把细胞破碎分离出细胞核,要在甘油或其他保护剂中进行

SDS十二烷基磺酸钠:可破坏细胞膜、核膜,并使组织蛋白与DNA分离

CATB是一种抽提液,破坏细胞膜的~

DNA不溶于异丙1醇,异丙1醇可以析出DNA,产生白色絮状沉淀,用枪头挑出就可以了

植物DNA的CTAB提取法:

1 称取新鲜叶片2-3g,剪碎放入研钵中,在液氮中研磨成粉末。

2 将粉末转移到的加有7ml经预热的1 5×CTAB提取缓冲液15ml离心管中,迅速混匀后置于65℃水浴中,温育30min。

3 取出离心管,冷却至室温,加入氯1仿/异戊1醇(24:1),充分混匀,室温下2300×g离心20min。

4 将上清转移至另一新的15ml离心管中,加入1/10体积10%的CTAB和等体积的氯1仿/异戊1醇。充分混匀,2300×g离心20min。

5 转移上清至另一新的15ml离心管中,加入等体积1%的CTAB沉淀缓冲液,轻轻摇晃至形成DNA絮状沉淀。1000×g离心10min,使DNA沉淀于管底。

6 加入1 5-2ml的1mol/LNaCl及5μlRNase置于56℃水浴中过夜。待DNA完全溶解后,加2-3ml4℃预冷的95%的冰乙醇使DNA沉淀,挑出DNA,置于1 5ml离心管中,用70%乙醇清洗30min,用离心机甩5s,倒出70%乙醇,再用95%乙醇浸泡5min,倒出95%乙醇,在超净工作台上吹干。

7 将风干的DNA直接在4℃保存备用或溶于100μlTE溶液中于-20℃保存。

提取DNA常用的方法

一.酚抽提法:先用蛋酶K、SDS破碎细胞,消化蛋白,然后用酚和酚-氯DNA大小为100-150kb

二.甲酰胺解聚法:破碎细胞同上,然后用高浓度甲酰胺解聚蛋白质与DNA的结合,再透析获得DNA可得DNA200kb左右。

三.玻璃棒缠绕法:用盐酸胍裂解细胞,将裂解物铺于乙醇上,然后用带钩或U型玻璃棒在界面轻搅,DNA沉淀液绕于玻棒。生成DNA约80kb。

四.异丙1醇沉淀法:基本同1法,仅用二倍容积异丙1醇替代乙醇,可去除小分子RNA(在异丙1醇中可溶状态)

五.表面活性剂快速制备法:用Triton X-100A或NP40表面活性剂破碎细胞,然后用蛋白酶K或酚去除蛋白,乙醇沉淀或透析。

六.加热法快速制备:加热96℃-100℃,五分钟,然后离心后取上清,可用于PCR反应。

七.碱变性快速制备:先用NaOH作用20分钟,再加HCI中和,离心后取上清,含少量DNA。

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